產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
發(fā)干DNA純化試劑盒
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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AD101 |
BcMag? 發(fā)干DNA純化試劑盒 |
50preps |
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AD102 |
BcMag? 發(fā)干DNA純化試劑盒 |
100preps |
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組件 |
存儲條件 |
目錄號#：AD101（50Preps） |
目錄號#：AD102（50Preps ） |
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BcMag? HO-DNA Beads |
4°C |
0. 5 ml |
1.0 ml |
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BcMag? Hair Pigment Removal Beads |
4°C |
0.3 ml |
0.6 ml |
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1x Lysis Buffer |
4°C |
5 ml |
10 ml |
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10x Binding buffer |
4°C |
1.5 ml |
3.0 ml |
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1x Elution Buffer |
4°C |
0.75 ml |
1.5 ml |
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Proteinase K |
-20°C |
10 mg |
20 mg |
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Proteinase K Suspension Buffer |
4°C |
0.5 ml |
1.0 ml |
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DTT |
-20°C |
75 mg |
150 mg |
運輸和儲存：根據(jù)上表，在收到商品時儲存試劑盒中各組分。
使用我們的發(fā)干DNA純化試劑盒，可以快速輕松地從無根頭發(fā)樣本中提取高質(zhì)量的DNA。簡單的方案，可靠的結(jié)果和簡便的操作使其成為您無根頭發(fā)DNA提取需求的完美選擇。
簡介
頭發(fā)在法醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中的意義
頭發(fā)是在犯罪現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)的常見證據(jù)，也是醫(yī)學(xué)研究調(diào)查中一種新的樣本類型。它在犯罪學(xué)研究中，可用于人口統(tǒng)計工作和基于DNA的分析研究。最有研究意義的DNA測序是對核DNA的短序列重復(fù)序列分析，但只有當(dāng)頭發(fā)根部和粘附組織存在時，這種研究方法才可能實現(xiàn)。
頭發(fā)在遺傳譜系中的優(yōu)勢
在法醫(yī)實驗中，無根毛發(fā)占法醫(yī)樣品的大多數(shù)。因為頭發(fā)本身的不溶性質(zhì)，其內(nèi)儲存的DNA可以保存近百年。而且以其為樣本提取的DNA比使用骨骼和牙齒樣本提取出的DNA更不易受到微生物污染影響。值得注意的是，一根頭發(fā)就是一個單獨的生物體樣本。因此，不同樣本混合，是法醫(yī)學(xué)研究中DNA研究的一個主要障礙，因為提純出的DNA 可能不是由同一個個體頭發(fā)產(chǎn)生的DNA。
頭發(fā)的結(jié)構(gòu)及其DNA
毛囊和發(fā)干（無根發(fā)干，圖1）是可以用于提取和純化DNA的頭發(fā)的兩個部位。毛囊可以提取出細(xì)胞核DNA（nuDNA）和線粒體DNA（mtDNA）。然而，發(fā)干通常被認(rèn)為只含有線粒體DNA，可能沒有核DNA存在。但是，在犯罪現(xiàn)場采集到的頭發(fā)樣本中，無毛囊的脫落頭發(fā)可能占樣本總量的90%。這些脫落的毛干可能經(jīng)歷了角質(zhì)化、硬化和誘導(dǎo)細(xì)胞核破裂的一些列過程。但是，對于未清洗的頭發(fā)，由于發(fā)干表面有組織脫落的細(xì)胞粘附在其上面，因此其具有較多的DNA可提取出，這可能是發(fā)干提取中核DNA的主要來源。盡管如此，據(jù)研究表明，在無根的毛干中仍保留一些核DNA，盡管數(shù)量很少，質(zhì)量也有很大差異。另一方面，發(fā)干中線粒體DNA也可以被完整的提純出來，用于下游應(yīng)用。
線粒體的DNA測序
人類頭發(fā)中線粒體DNA分析，可用于嫌疑人的確認(rèn)。然而，與核DNA（nuDNA）不同，個體的線粒體DNA都是遺傳自母系核酸系統(tǒng)，因此缺乏選擇性潛力。除非在一些罕見的情況下，父本核酸體系中的線粒體DNA才會遺傳到子代核酸中，否則，線粒體DNA都是從母親一側(cè)繼承的。因此，線粒體基因測序無法將祖母與她的女兒或?qū)O子區(qū)分開來，只有對細(xì)胞核DNA的測序才能實現(xiàn)這種區(qū)分。但是，在調(diào)查各種毛發(fā)類樣本時，線粒體DNA測序也可以作為物種鑒定依據(jù)，提供重要信息。因為并非所有的毛發(fā)樣本都是屬于人類的，所以用這種方法可以識別出脫落毛發(fā)的動物。
用于短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）分型的NuDNA（核DNA）
通常，法醫(yī)實驗室將首先會檢查頭發(fā)是否存在發(fā)根。如果樣本缺乏發(fā)根部位，法醫(yī)實驗室通常不會對其處理或將樣本進行線粒體DNA提取，然后做線粒體DNA（mtDNA）測序，這在歷史上被證明比用發(fā)干提取核DNA有更好的結(jié)果。但是如果發(fā)干中存在核DNA（nuDNA），則可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法進行犯罪嫌疑人識別，如STR分型。最近，Brandhagen等人研究發(fā)現(xiàn)，盡管發(fā)干中核DNA已經(jīng)片段化，但仍可以從脫落的頭發(fā)中提取出[1]。令人驚訝的是，研究證明發(fā)干中核DNA占總DNA的大部分，這就消除了發(fā)干中只有線粒體DNA可以從無根毛發(fā)中回收的假設(shè)，并證明了與線粒體DNA相比，在發(fā)干中核DNA是豐富的。因此，該研究表明了，死亡的毛發(fā)中存在細(xì)胞核DNA，但是使用傳統(tǒng)核酸提取技術(shù)無法提取出來，但是證明了，細(xì)胞核DNA是大量存在，但DNA質(zhì)量較差。
優(yōu)化毛干DNA提取工藝
DNA提取是發(fā)干法醫(yī)分析的第一步。在一根無根毛發(fā)中只能提取出皮克級別的超短DNA片段。由于實際問題和技術(shù)原因，使用不同的提取方法，優(yōu)化條件從不同樣品中，最大程度的提高收集DNA的產(chǎn)量和純度至關(guān)重要。因此，尋找一種高效、穩(wěn)定和簡單的提取DNA和擴增nuDNA靶點的技術(shù)是毛干DNA提取和擴增的主要挑戰(zhàn)。因此，研發(fā)出一種從發(fā)干中提取DNA并且能去除DNA污染的簡單方法，同時可以顯著縮短分析時間，這對法醫(yī)和人口研究是很有價值的。
BcMag? Hair Shaft DNA Purification Kit使用磁珠和優(yōu)化的脫礦質(zhì)緩沖液，被設(shè)計用于從單根頭發(fā)樣本中高效、有序地提取出總核酸。純化的基因組DNA具有最高的完整性，可用于各種下游應(yīng)用，如qPCR、STR等。
圖1脫毛色素
發(fā)干DNA純化的工作流程和結(jié)果。
1.在95°C下裂解頭發(fā)2小時。
2.添加磁珠以結(jié)合DNA。
3.清洗磁珠
4.從磁珠中洗脫DNA
參考文獻
1. Brandhagen MD, Loreille O, Irwin JA. Fragmented Nuclear DNA Is the Predominant Genetic Material in Human Hair Shafts. Genes. 2018 Dec;9(12):640.
2. Melton T, Holland C. Routine forensic use of the mitochondrial 12S ribosomal RNA gene for species identification. Journal of forensic sciences. 2007 Nov;52(6):1305-7.
3. Luo S, Valencia CA, Zhang J, Lee NC, Slone J, Gui B, Wang X, Li Z, Dell S, Brown J, Chen SM. Biparental inheritance of mitochondrial DNA in humans. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2018 Dec 18;115(51):13039-44.
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7. Brandhagen MD, Loreille O, Irwin JA. Fragmented Nuclear DNA Is the Predominant Genetic Material in Human Hair Shafts. Genes. 2018 Dec;9(12):640.
8. Parker GJ, Leppert T, Anex DS, Hilmer JK, Matsunami N, Baird L, Stevens J, Parsawar K, Durbin-Johnson BP, Rocke DM, Nelson C. Demonstration of protein-based human identification using the hair shaft proteome. PloS one. 2016 Sep 7;11(9):e0160653.
